Features of innate and adaptive immunity in patients with Parkinson's disease

Full Text

Введение

Болезнь Паркинсона (БП) является одной из значимых медицинских проблем XXI в. С целью разработки новых методов лечения предлагаются теории, объясняющие патогенез заболевания, основанные на изучении показателей как локального, так и системного воспаления, в том числе иммунологических. Исследование патогенеза БП выявило дисфункцию иммунной системы, в частности, врождённый нейровоспалительный ответ как потенциальный фактор предрасположенности к заболеванию [1–3].

В нейровоспалительной активности при БП существенную роль играет Т-клеточное звено иммунной системы [4]. В настоящее время активно изучается гетерогенная субпопуляция γδТ-лимфоцитов, доминирующая в слизистых оболочках и коже, сочетающая свойства и функции клеток как врождённого, так и адаптивного иммунитета.

Закладка эпителия тимуса происходит на 6-й неделе развития плода. Клетки-предшественники, мигрирующие в тимус из фетальной печени на 8-й неделе эмбрионального развития, созревают в γδТ-клетки с ограниченной вариабельностью Т-клеточного рецептора (T-cell receptor, TCR), эмигрируют из тимуса в эмбриональном периоде в кожу, слизистые оболочки языка и репродуктивную систему, в последующем самостоятельно поддерживаются локально. Потомки клеток-предшественников второй волны миграции из фетальной печени в тимус не покидают его, образуя резерв для срочной регенерации (при стрессе, воздействии повреждающих факторов). Позже в тимусе формируются γδТ-лимфоциты с более широким спектром специфичностей TCR, покидающие тимус после рождения (до 13 сут) и заселяющие слизистые оболочки различных органов.

После рождения прекоммитированные к развитию в Т-клетки лимфоциты, покидая костный мозг, мигрируют в тимус, где проходят основные этапы развития [5]. Этапы дифференцировки в тимусе включают стадию дубль-негативных CD4^–CD8^–-клеток (DN), более зрелая популяция имеет фенотип CD4⁺CD8⁺ — дубль-позитивные клетки, они слабо экспрессируют на мембране CD3. Зрелые тимоциты, как и периферические Т-клетки, экспрессируют один из корецепторов: CD3⁺CD4⁺CD8^–-хелперы, CD3⁺CD4^–CD8⁺-цитотоксические Т-лимфоциты. На стадии DN происходит дивергенция тимоцитов к дифференцировке в различные линии αβ или γδ, запускается основное событие дифференцировки Т-лимфоцитов — реаранжировка V-генов TCR в последовательности δ, γ, β [6]. Уже на стадии DN3 тимоцит экспрессирует γδTCR и быстро эмигрирует из тимуса. У человека вариабельные домены γδTCR кодируются тремя основными Vδ-генами и не менее чем шестью Vγ-генами, что обусловливает высокий полиморфизм γδTCR, большой потенциал к формированию разно-образных лиганд-связывающих участков [7]. Не более 5% от общего числа покинувших тимус Т-лимфоцитов составляют γδT-клетки. Большинство Т-клеток имеют TCR, которые содержат α- и β-цепи, взаимодействуют с пептидными антигенами, представляемыми в комплексе с молекулами системы HLA антигенпрезентирующими клетками (классические Т-лимфоциты). Популяция γδТ-лимфоцитов экспрессирует уникальный Т-клеточный рецептор, способный распознавать собственные и чужеродные антигены непептидной природы в отсутствие необходимых для презентации молекул I или II классов системы HLA [8].

γδТ-лимфоциты впервые были описаны в середине 1980-х гг. [9, 10]. В периферической крови взрослого человека γδТ-клетки составляют около 5% общего числа CD3⁺-Т-лимфоцитов. Во всех лимфоидных органах (тимус, селезенка, лимфатические узлы, миндалины), в эпителии репродуктивных органов, респираторного тракта, языка общее содержание γδТ-клеток также составляет менее 5% зрелых Т-лимфоцитов [11, 12]. Существуют корреляции экспрессии γδTCR с определёнными анатомическими зонами. Так, резидентные γδT-клетки с вариантами CD3⁺Vδ1⁺-TCR или CD3⁺Vδ3⁺-TCR доминируют в слизистых оболочках желудочно-кишечного, респираторного и урогенитального трактов, в крови основная субпопуляция Т-лимфоцитов имеет Vγ9Vδ2-TCR [13].

Активация и функциональная активность γδT-клеток определяется экспрессией на мембране различных рецепторов, в том числе рецепторов клеток врождённого иммунитета. Так, γδT-клетки экспрессируют активационные рецепторы натуральных клеток-киллеров NKG2D, которые при взаимодействии с лигандами — белковыми молекулами, «инфицированных» внутриклеточными возбудителями и опухолевых клеток, реализуют цитотоксическую функцию, т.е. противовирусную, противоопухолевую защиту. Киллинг этих клеток-мишеней γδT-лимфоцитами через индукцию апоптоза, опосредованный перфорин–гранзим, Fas–Fas-лиганд, TNF–TNFR1 (tumor necrosis factor receptor superfamily, member 1A) взаимодействием — особенность этой субпопуляции лимфоцитов. Активация супрессирую-щих рецепторов CD94/NKG2A и CD94/NKG2C на мембране γδT-клеток подавляет киллинг клеток-мишеней [14].

На мембране γδT-клеток определены рецепторы, распоз-нающие патоген-ассоциированные молекулярные паттерны (общие структурные особенности, свойственные группам молекул чужеродных и опасных микроорганизмов): Толл-подобные рецепторы (TLR), рецепторы к полисахаридам бактерий, грибам, CD36, скэвенджер-рецепторы, обусловливающие участие этих клеток в антибактериальной защите. При контактах с бактериями эта субпопуляция может менять регуляторную функцию (продукция цитокинов) на антигенпрезентирующую, т.к. экспрессирует антигены НLAII класса, необходимые для эффективной презентации антигенов классическим СD4⁺-Т-хелперам, что свидетельствует о функциональной пластичности γδT-клеток. Популяция Vγ9Vδ2 Т-лимфоцитов распознает фосфатные антигены pAgs, которые имеют микробное происхождение или являются эндогенными промежуточными продуктами мевалонатного пути (изопренилпирофосфат) и накапливаются в клетках, «инфицированных» вирусами, и опухолевых клетках. Vγ9Vδ2 Т-лимфоциты осуществляют иммунный надзор, инициируя поликлональные ответы на pAgs после взаимодействия TCR с экспрессированным на клетке-мишени бутирофилином — членом семейства BTN3A1/CD277 [15].

γδТ-клетки экспрессируют на мембране рецепторы цитокинов интерлейкинов (ИЛ) -2R, -15R, -23R и др., которые активируют и способствуют реализации функциональной активности или супрессируют эффекторные функции этих клеток, в том числе пролиферативную и регуляторную [8]. Активация γδT-клеток через TCR стимулирует продукцию интерферона-γ (ИФН-γ), ИЛ-17, фактора некроза опухоли (ФНО), CCL3/4, CCL5, которые являются промоторами активации и миграции других клеток иммунной системы в зону воспаления; активация через костимуляторные молекулы CD27, CD30 способствует продукции ИФН-γ и ИЛ-4. Функциональные фенотипы γδ: γδT1-клетки, продуцирующие ИФН-γ, и γδT17-клетки, синтезирующие ИЛ-17, генерируются в течение пренатального тимического развития.

Коммитированная к продукции ИЛ-17 субпопуляция γδT-лимфоцитов характеризуется экспрессией ИЛ-23R, CCR6 и отсутствием CD27 на клеточной мембране. Супрессию нейроиммунного воспаления при БП реализует противовоспалительный цитокин ИЛ-10, в крови он продуцируется клетками врождённого иммунитета (дендритными, макрофагами, эозинофилами, нейтрофилами, тучными клетками, NK-клетками) и клетками адаптивного иммунитета — T-хелперами: Th1, T2, Th17, T- и B-регуляторными клетками [16, 17]. В центральной нервной системе ИЛ-10 экспрессируется клетками микроглии, астроцитами и нейронами [18, 19]. ИЛ-10 ингибирует продукцию ФНО, ИЛ-1β, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-12 и ИЛ-23, пролиферацию и синтез цитокинов Th1 (ИЛ-2 и ИФН-γ), Th2 (ИЛ-4, ИЛ-5), но не супрессирует синтез ИЛ17 Th17 [20, 21].

Роль γδТ-клеток в иммунном ответе на чужеродные антигены, противоопухолевой защите, патогенезе аутоиммунных заболеваний характеризуется некоторыми особенностями. γδТ-клетки способны распознавать различные типы антигенов, спонтанно продуцировать цитокины, обладают различными и уникальными функциями, в том числе антигенпрезентирующей, привержены к определённой анатомической локализации. Им принадлежит решающая роль в защите от специфических патогенов, они способны к активации дендритных клеток.

Несмотря на то, что γδТ-клетки являются «минорной» субпопуляцией, между их количеством и вариантами течения/исходами заболеваний были выявлены значимые корреляции [22–24]. Так, содержание γδТ-клеток резко возрастает (до 60% от общего количества Т-клеток) в крови больных с различными инфекционными заболеваниями [25–27]. γδТ-лимфоциты первыми запускают иммунный ответ при острых инфекциях (сальмонеллез, туляремия, листериоз, токсоплазмоз). Внедрение возбудителей активирует γδТ-клетки, что сопровождается продукцией цитокинов: ИФН-γ при Listeria monocytogenes и ИЛ-4 при Nippostrongylus brasiliensis. На экспериментальных моделях инфекционных и аутоиммунных заболеваний было показано, что γδТ-клетки являются основными продуцентами ИЛ-17 [28], который инициирует воспалительные реакции, стимулируя созревание и рекрутирование нейтрофилов из костного мозга [29]. Кроме того, на ранних стадиях рассеянного склероза также описано повышенное содержание γδТ-клеток (до 20–30% общего количества Т-клеток) [30].

В 1994 г. U. Fiszer и соавт. впервые показали, что у пациентов с БП содержание γδТ-лимфоцитов как в периферической крови, так и в ликворе было выше, чем у пациентов с другими неврологическими заболеваниями [31]. Стимулом к изучению субпопуляций Т-лимфоцитов при БП послужили исследования, определившие важный вклад системного воспаления в патогенез БП.

Среди возможных «регуляторов» системного воспаления при БП кишечная микробиота в последние годы стала одним из самых популярных объектов исследования. Подробное изучение её состава стало возможным благодаря внедрению в практику современных методов лабораторной диагностики. Кишечная микробиота находится в тесном контакте с эпителиальным барьером кишечника, подавляющее число иммунных процессов происходит в барьерных тканях, которые подвергаются постоянной антигенной нагрузке. Эпителиальные клетки экспрессируют рецепторы, взаимодействие которых с микроорганизмами приводит к активации и продукции противомикробных пептидов, синтезу цитокинов, усилению экспрессии на эпителиоцитах корецепторов для клеток иммунной системы. М-клетки эпителиального слоя контролируют перенос через барьер чужеродного материала. Такой контролируемый «трафик» необходим для сигнализации иммунной системе о дисбалансе микробиоты. В подэпителиальной рыхлой соединительной ткани lamina propria (собственная пластинка) диффузно расположены клетки врождённого иммунитета, под эпителием в lamina propria — «изолированные лимфоидные фолликулы» с Т-, В-клеточными зонами и герминативным центром, где присутствуют αβТСR CD4⁺-Т-хелперы (Th1, Th2, Th17) и продуцирующие ИЛ-10 Т-регуляторные клетки, а также В-лимфоциты. Доставляемый М-клетками в фолликулы антигенный материал запускает адаптивный (специфический) иммунный ответ с участием региональных лимфатических образований (аппендикс, миндалины, пейеровы бляшки и др.), локальный иммунный ответ переходит на системный уровень [32].

Эволюция организма-хозяина проходила совместно с бактериями-комменсалами кишечника с целью реализации симбиотических отношений посредством синтеза и реагирования на некоторые общие медиаторы. Результатом совместной эволюции явилось расширение функций микробиоты: её участие в метаболизме нерасщепляемых углеводов, обеспечении хозяина энергоносителями (АТФ), жирными и желчными кислотами, в синтезе витаминов, конкуренции с патогенными микроорганизмами, предотвращении колонизации ими кишечного тракта хозяина и стимуляции его мукозального иммунитета. Кишечник стал местом синтеза веществ, способных влиять на секрецию гормонов, работу нервной и иммунной систем посредством синтеза нейромедиаторов, метаболитов и жирных кислот.

Для объяснения влияния микробиоты кишечника на физиологию хозяина были предложены три механизма [33]:

• секреция нейромедиаторов, нейропептидов и метаболитов, которые могут непосредственно стимулировать рецепторы в нейронах кишечной нервной системы, тем самым вызывая и/или модулируя нервные сигналы, непосредственно влияющие на физиологию кишечника, или мигрировать через блуждающий нерв в центральную нервную систему;
• возможность метаболитов и гормонов, производимых микробиотой в кишечном тракте, диффундировать через стенку кишечника в портальную систему и оказывать влияние дистантно;
• стимуляция медиаторами, продуцируемыми кишечной микробиотой (короткоцепочечными жирными кислотами), рецепторов, экспрессированных на мембране клеток иммунной системы, — таким образом, микробиота участвует в регуляции иммунного ответа как на локальном, так и на системном уровнях.

Ранее с использованием метода газовой хроматографии, совмещённого с масс-спектрометрией, нами было показано, что у пациентов с развёрнутой стадией БП в пристеночном слое кишечника отмечается увеличение общего количества микробных маркеров на 43% по сравнению с группой контроля [34]. Увеличение происходило за счет двукратного повышения количества маркеров условно-патогенной микрофлоры, что сопровождалось снижением вдвое количества микробных маркеров полезной микрофлоры.

В случае развития клинически значимых запоров у пациентов с БП количество бактерий в кишечнике увеличивается, приводя к развитию синдрома избыточного бактериального роста. Показано, что этот синдром коррелирует с тяжестью двигательных расстройств, нарушениями ходьбы, застываниями и выраженностью моторных флуктуаций [35]. Полученные корреляции, в первую очередь, объясняются снижением биодоступности (поступления из кишечника в кровь) противопаркинсонических препаратов на фоне синдрома избыточного бактериального роста [36]. Данная теория подтверждается результатами исследований, проведённых V. Maini Rekdal и соавт. [37]. Ими была продемонстрирована способность Enterococcus faecalis декарбоксилировать леводопу до дофамина, а также возможность дальнейшего дегидроксилирования дофамина до тирамина бактерией Eggerthella lenta.

Цель исследования — изучение субпопуляций лимфоцитов, неклассических γδТ-лимфоцитов и продукции цитокинов у пациентов с третьей стадией БП, испытывающих моторные флуктуации.

Материалы и методы

В исследование были включены 20 пациентов (11 мужчин и 9 женщин; средний возраст 69,0 ± 4,5 года) с БП, получающих комбинированную дофаминергическую терапию: препараты леводопы + агонисты дофаминовых рецепторов, средняя эквивалентная доза леводопы составила 730,4 ± 150,6 мг/сут. С учётом предполагаемой роли хронического запора у пациентов с БП в поддержании дисбиотических состояний и хронического воспаления наличие запоров являлось критерием включения пациента в исследование.

Критерии включения:

• 3 стадия по шкале Хен–Яра;
• наличие моторных флуктуаций;
• наличие симптомов хронического запора.

Наличие моторных флуктуаций определяли с помощью краткого опросника для выявления феномена истощения действия дозы леводопы (WOQ-9) [38].

Верификация хронического запора у пациентов с БП проводилась согласно клиническим рекомендациям Российской гастроэнтерологической ассоциации по диагностике и лечению взрослых пациентов с хроническим запором [39].

Группу контроля составили 20 пациентов (8 мужчин и 12 женщин; средний возраст 67,0 ± 2,5 года) с хроническими цереброваскулярными заболеваниями (дисциркуляторная энцефалопатия I и II стадий).

Критерии невключения:

• верифицированные заболевания крови, желудочно- кишечного тракта, эндокринных органов;
• больные, имеющие оценку по Монреальской когнитивной шкале менее 26 баллов.

У всех пациентов определяли субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови и уровень цитокинов. Кровь для исследования брали из локтевой вены, в качестве антикоагулянта использовали ЭДТА. Для визуализации субпопуляций лимфоцитов использовали моноклональные антитела: HLADR-FITC, CD4-PE, CD3-ECD, CD56-PC5.5, CD25-PC7, CD8-APC, CD19-APC-AF700, CD45-APC-AF750. В качестве лизирующего раствора использовали VersaLyse. Пробы анализировали на проточном цитофлюориметре «Navios» в многоцветном протоколе (прибор и реактивы «Beckman Coulter»). Популяцию лимфоцитов оценивали как CD45+brightSSdim-клетки. Анализ образцов проводили при наборе 5000 событий в лимфоцитарном регионе.

Субпопуляции B-лимфоцитов выявляли с использованием моноклональных антител CD19-FITC, CD27-PE, CD5-PC5. Пробы анализировали на проточном цитофлюориметре «Cytomics FC 500» в многоцветном протоколе (прибор и реактивы «Beckman Coulter»). Популяцию лимфоцитов оценивали как FSdimSSdim-клетки. Анализ образцов проводили при наборе 5000 событий в лимфоцитарном регионе.

При определении субпопуляций γδT-лимфоцитов использовали моноклональные антитела CD4-FITC, CD8-PE, CD3-ECD, TCRγδ-PC5, CD8-APC, CD45-APC-AF750. После лизиса эритроцитов пробы отмывали центрифугированием в фосфатно-солевом буфере при 1500 об/мин в течение 5 мин. Пробы анализировали на проточном цито-флюориметре «Navios» в многоцветном протоколе (прибор и реактивы «Beckman Coulter»). Популяцию лимфоцитов оценивали как CD45+brightSSdim-клетки. Анализ образцов проводили при наборе 5000 событий в лимфоцитарном регионе. В связи с отсутствием референсных значений для субпопуляций γδT-лимфоцитов оценку изменений проводили путём сравнения двух групп.

Уровни цитокинов ИЛ-1β, ИЛ-6, ФНО, ИЛ-10 в культуральных средах (спонтанная, индуцированная продукция) и в сыворотке определяли с использованием наборов реагентов для иммуноферментного анализа (АО «Вектор-Бест», Международный сертификат ISO 13485). Чувствительность набора для определения ИЛ-6 не превышает 0,5 пг/мл, для ИЛ-1β, ФНО, ИЛ-10 — 1,0 пг/мл.

Статистическую обработку проводили в программе «Statistica 8.0». Для выявления различий применяли непараметрический критерий Манна–Уитни, для выявления зависимости — коэффициент корреляции Спирмена. Результаты статистического анализа считали значимыми при р < 0,05. Результаты представлены в виде: медиана [1-й квартиль; 3-й квартиль].

Результаты

При исследовании лимфоцитов периферической крови выявлено, что количественные характеристики популяций лимфоцитов, определённых у пациентов с БП и у лиц группы сравнения, не выходили за границы референсного интервала. Однако общее количество зрелых CD3⁺-Т-лимфоцитов в группе пациентов с БП было значимо ниже, чем в группе сравнения (табл. 1). По количеству CD3⁺CD4⁺-Т-хелперов и CD3⁺CD8⁺-Т-цитотоксических лимфоцитов группы были сопоставимы. Количество CD3⁺CD56⁺-ТNK-клеток в группе пациентов с БП было достоверно ниже, чем в группе сравнения. При этом в группе пациентов с БП количество CD3^–CD56⁺-NK-клеток было значимо выше, чем в группе сравнения. Кроме того, в основной группе выявлено значимое повышение количества активированных CD3^–CD8⁺-NK-клеток. Общее количество В-лимфоцитов, количество В1-лимфоцитов было сопоставимо в обеих группах, однако у пациентов с БП значимо снижено количество CD19⁺CD27⁺-В-клеток памяти.

 

Таблица 1. Результаты иммунофенотипирования лимфоцитов периферической крови, % (Ме [Q₁; Q₃]) / Table 1. Results of immunophenotyping peripheral blood lymphocytes, % (Ме [Q₁; Q₃])

Лимфоциты Lymphocytes	Норма Normal	БП PD	Группа сравнения Comparison group	Критерий Манна–Уитни Mann—Whitney test
CD3+	52–76	74,0 [60, 0; 77, 0]	80,0 [75, 0; 82, 0]	0,014
CD3+CD56+	0,1–8	4,7 [2, 7; 5, 2]	7,8 [3, 4; 14, 2]	0,038
CD3+CD4+	31–46	45,0 [39, 0; 53, 6]	49,2 [43, 0; 60, 0]	0,274
CD3+CD8+	23–40	24,3 [20, 0; 32, 0]	26,4 [20, 0; 32, 0]	0,722
CD4+CD8+	0,1–1,1	1,5 [0, 7; 3, 7]	1,0 [0, 6; 1, 5]	0,285
CD3–CD8+	1,5–6	7,0 [5, 4; 9, 1]	3,5 [2, 3; 4, 1]	0,001
CD3–CD56+	9–19	16,4 [13, 2; 21, 6]	8,7 [7, 0; 13, 0]	0,001
CD3+-TCRγδ	2–7	1,8 [1, 2; 3, 5]	1,4 [1, 1; 3, 1]	0,602
CD19+	6–18	7,5 [5, 0; 11, 0]	13,0 [10, 0; 16, 0]	0,194
CD19+CD5+	0–3,5	1,4 [0, 5; 1, 9]	2,5 [1, 7; 3, 3]	0,451
CD19+CD27+	2–7	2,0 [1, 7; 2, 6]	4,7 [3, 1; 6, 3]	0,031

 

При оценке субпопуляций γδТ-лимфоцитов выявлено, что количество Т-хелперов CD4⁺CD8^–-TCRγδ было достоверно меньше в группе пациентов с БП, чем в группе сравнения (табл. 2). В отношении остальных субпопуляций Т-лимфоцитов значимых различий между группами не выявлено.

 

Таблица 2. Результаты иммунофенотипирования γδТ-лимфоцитов, % (Ме [Q₁; Q₃]) / Table 2. Results of immunophenotyping γδТ cells, % (Ме [Q₁; Q₃])

Показатель Parameter	БП PD	Группа сравнения Comparison group	Критерий Манна–Уитни Mann—Whitney test
CD4–СD8+	25,1 [22, 2; 35, 5]	19,1 [18, 0; 27, 3]	0,250
CD4–CD8+СD56+	17,6 [10, 3; 32, 1]	43,4 [21, 9; 50, 8]	0,052
CD4+CD8–	13,6 [8, 4; 19, 5]	29,8 [17, 0; 37, 7]	0,016
CD4+CD8–CD56+	2,9 [1, 5; 7, 5]	4,2 [1, 5; 10, 9]	0,660
CD4–CD8–	57,4 [52, 8; 67, 6]	47,9 [37, 2; 58, 7]	0,163
CD4–CD8–CD56+	23,6 [13, 5; 40, 0]	22,5 [9, 8; 39, 5]	0,827
CD3+CD56+	15,6 [9, 0; 20, 9]	20,2 [13, 6; 33, 8]	0,155
CD3+CD56–	78,7 [64, 6; 84, 3]	78,0 [64, 7; 83, 0]	0,743

 

При исследовании уровней цитокинов в группе пациентов с БП обнаружено значимое повышение индуцированной продукции ИЛ-1β, а также высокая спонтанная продукция ИЛ-10 (табл. 3). Уровень медианы индуцированной продукции ИЛ-10 в исследуемой группе не выходил за границы референсных значений, однако следует отметить сильный разброс полученных результатов, что требует отдельного анализа и, возможно, определяет гетерогенность течения БП.

 

Таблица 3. Результаты оценки уровней цитокинов у пациентов с БП, пг/мл (Ме [Q₁; Q₃]) / Table 3. Results of measuring cytokine levels in patients with PD, pg/ml (Ме [Q₁; Q₃])

Показатель Parameter	Норма Normal	Результаты Results
ИЛ-1β / IL-1β
спонтанная продукция / spontaneous production	0–107	2,3 [1; 8]
индуцированная продукция / induced production	50–1200	1796,0 [491; 3181]
содержание в сыворотке / content in serum	0–11	1,5 [1; 4]
ИЛ-6 / IL-6
спонтанная продукция / spontaneous production	30–280	1,0 [1; 1]
индуцированная продукция / induced production	11 450–42 200	11249,5 [8951; 14041]
содержание в сыворотке / content in serum	0–10	1,0 [1; 1]
ФНО / Tumor necrosis factor
спонтанная продукция / spontaneous production	7–30	1,0 [1; 4]
индуцированная продукция / induced production	2810–5700	2532,5 [931; 10199]
содержание в сыворотке / content in serum	0–6	8,5 [1; 56]
ИЛ-10 / IL-10
спонтанная продукция / spontaneous production	0–23	227,5 [13; 482]
индуцированная продукция / induced production	66–335	241,0 [94; 447]
содержание в сыворотке / content in serum	0–31	2 [1; 5]

 

Корреляционный анализ субпопуляции Т-хелперов CD4⁺CD8^–-TCRγδ и цитокинов в группе пациентов с БП продемонстрировал наличие достоверной обратной зависимости этой субпопуляции Т-хелперов с индуцированной продукцией ИЛ-10 и достоверной прямой зависимости с содержанием провоспалительного цитокина ИЛ-1β (табл. 4). Кроме того, была выявлена тенденция к повышению спонтанной продукции ИЛ-10 при снижении Т-хелперов CD4⁺CD8^–-TCRγδ.

 

Таблица 4. Результаты корреляционного анализа содержания CD4⁺CD8^–-TCRγδ субпопуляции Т-хелперов и ИЛ-1β, ИЛ-10 / Table 4. Results of the correlation analysis between the TCRγδ CD4⁺CD8^– subpopulation numbers and the IL-1β, IL-10 numbers

Показатель Parameter	CD4+CD8–-TCRγδ субпопуляция Т-хелперов TCRγδ CD4+CD8– subpopulation of T helper cells
	r	p
ИЛ-1β IL-1β	0,648	0,042
ИЛ-10, индуцированная продукция IL-10, induced production	–0,745	0,048
ИЛ-10, спонтанная продукция IL-10, spontaneous production	–0,602	0,0506

 

Обсуждение

Среди отечественных трудов, посвящённых изучению субпопуляционного состава лимфоцитов и клеток врождённого иммунитета у пациентов с БП, представляют интерес данные, изложенные Е.В. Бочаровым и соавт. [40]. Ими были выявлены следующие изменения: снижение общего числа Т-лимфоцитов (CD3⁺), преимущественно за счёт Т-хелперов (CD4⁺), CD4⁺/CD8⁺-иммунорегуляторного индекса, а также снижение В-лимфоцитов (CD20⁺) и количества лимфоцитов, экспрессирующих HLA-DR (антигены HLA II), что сочеталось с увеличением количества лимфоцитов с экспрессией рецептора к ИЛ-2 (CD25⁺) и количества клеток, несущих на мембране CD95⁺ — маркер готовности к апоптозу. Врождённый иммунитет характеризовался увеличением количества макрофагов (CD11b⁺ и СD18⁺) и натуральных киллеров (NK16⁺). Общими изменениями в субпопуляционном составе лимфоцитов крови, выявленными в исследовании цитируемых авторов и в нашей работе, являются снижение Т-лимфоцитов у пациентов с БП, увеличение в крови CD3^–CD56⁺-NK-клеток, наличие параметров активности иммунного ответа: увеличение количества лимфоцитов, экспрессирующих маркер ранней активации в CD25⁺, а в нашей работе — увеличение количества активированных NK-клеток, значимое повышение индуцированной продукции провоспалительного цитокина ИЛ-1β.

Компоненты клеточной стенки и внутреннего содержания комменсалов и патогенов распознаются TLR эпителия и клетками врождённого иммунитета [41], а микробиота непрерывно сигнализирует мукозоассоциированной лимфоидной ткани и поддерживает барьерный иммунитет в состоянии хронической активации. Однако микробиота обладает и иммуносупрессивными/толерогенными свойствами. Bacteroides fragilis при взаимодействии с TLR2 на клетках врождённого иммунитета может блокировать их провоспалительную активность [32]. Микробиота может активировать комменсал-специфические Т-регуляторные клетки, что приводит к продукции ими противовоспалительного цитокина ИЛ-10 [42]. Таким образом, эти процессы обусловлены взаимодействием микробиоты, барьерного эпителия и клеток врождённого и адаптивного иммунитета в сайте воспаления.

C. Zhou и соавт. продемонстрировали снижение в крови пациентов с более тяжёлым течением БП (по шкале UPDRS) количества TNK и γδT-лимфоцитов в сравнении с этими показателями у здоровых лиц [43]. В нашем исследовании количество CD4⁺CD8^–-TCRγδ в периферической крови было достоверно меньше в группе пациентов с БП и сочеталось с аберрантной спонтанной продукцией ИЛ-10. Спонтанная продукция цитокинов γδT-лимфоцитами участвует в поддержании баланса между воспалением и толерантностью [14]. Известно, что основными продуцентами ИЛ-10 являются Т-регуляторные клетки с TCR, представленным αβ- или γδ-цепями, а также В-регуляторные клетки. Вероятно, выраженная спонтанная продукция ИЛ-10 у пациентов с БП связана в том числе с повышенной активностью CD4⁺CD8^–-TCRγδ клеток, а именно с регуляторной субпопуляцией.

Известны работы, в которых показано, что количество Т-лимфоцитов меняется в процессе прогрессирования нейродегенерации при БП. Более того, показана взаимосвязь уровня так называемых α-синуклеин-реактивных Т-лимфоцитов со стадией заболевания, возрастом пациента, а также дозой леводопы [44]. α-Синуклеин-реактивные Т-лимфоциты появляются на премоторной стадии БП, достигают максимума на этапе развития моторных симптомов и значительно снижаются на развёрнутых стадиях. Нельзя исключать, что уровень γδT-клеток также меняется в процессе прогрессирования БП, а принимая во внимание роль данных клеток в антибактериальной защите, можно предположить, что эти изменения могут быть связаны и с составом микробиоты.

Таким образом, полученные нами данные позволяют по-новому оценить вклад γδT-клеток в патогенез БП, указывают на их роль в прогрессировании заболевания, а также на взаимосвязь с изменениями (качественными и количественными) кишечной микробиоты при этой патологии.

About the authors

Igor V. Krasakov

A.M. Nikiforov Russian Center of Emergency and Radiation Medicine; S.M. Kirov Military Medical Academy

Author for correspondence.
Email: annaly-nevrologii@neurology.ru
ORCID iD: 0000-0001-6092-0659

Cand. Sci. (Med.), Head, Center of Extrapyramidal Disorders, assistant, Department of nervous diseases

Russian Federation, St. Petersburg; St. Petersburg

Nataliya I. Davydova

A.M. Nikiforov Russian Center of Emergency and Radiation Medicine

Email: annaly-nevrologii@neurology.ru
ORCID iD: 0000-0001-8644-905X

Cand. Sci. (Med.), senior researcher, Head, Clinical immunology laboratory

Russian Federation, St. Petersburg

Anastasiya A. Kalashnikova

A.M. Nikiforov Russian Center of Emergency and Radiation Medicine

Email: annaly-nevrologii@neurology.ru
ORCID iD: 0000-0002-5338-0866

Cand. Sci. (Biol.), senior researcher, Clinical immunology laboratory

Russian Federation, St. Petersburg

Igor V. Litvinenko

S.M. Kirov Military Medical Academy

Email: annaly-nevrologii@neurology.ru
ORCID iD: 0000-0001-8988-3011

D. Sci. (Med.), Prof., Head, Department of nervous diseases

Russian Federation, St. Petersburg

Sergey S. Aleksanin

A.M. Nikiforov Russian Center of Emergency and Radiation Medicine

Email: annaly-nevrologii@neurology.ru
ORCID iD: 0000-0001-6998-1669

D. Sci. (Med.), Prof., Director

Russian Federation, St. Petersburg

Nataliya V. Makarova

A.M. Nikiforov Russian Center of Emergency and Radiation Medicine

Email: annaly-nevrologii@neurology.ru
ORCID iD: 0000-0002-8697-0096

Cand. Sci. (Phys. and Math.), leading researcher, Head, Statistical analysis department, Medical Register, EMERCOM of Russia research laboratory of statistical analysis and forecasting

Russian Federation, St. Petersburg

References

Supplementary files